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內容簡介

　　《精編實用免疫學實驗》通過精選，收集編著瞭涉及機體免疫功能檢測、抗體製備及利用免疫學原理方法進行的抗原抗體檢測等先進、實用內容的實驗，概括為八大部分：抗體製備、純化及標記；利用抗原抗體反應進行的檢測；機體免疫細胞的分離與鑒定；機體特異性細胞免疫功能的檢測；機體體液免疫功能的檢測；機體非特異性免疫功能檢測；HLA分型；淋巴細胞活化信號轉導分子檢測。

內頁插圖

目錄

第一篇 抗體的製備、純化及標記
一、免疫血清的製備及效價檢測
實驗1 弗氏佐劑的製備及與抗原的混閤
實驗2 抗原免疫兔子
實驗3 免疫血清的分離與保存
實驗4 雙嚮瓊脂擴散試驗檢測兔抗羊IgG血清效價
實驗5 凝集實驗檢測兔抗大腸杆菌抗血清效價
二、單剋隆抗體的製備
實驗6 單剋隆抗體的製備
三、抗體的純化
實驗7 鹽析法純化免疫球蛋白
實驗8 親和柱層析法純化免疫球蛋白
實驗9 SDS-PAGE法檢測免疫球蛋白純度
四、抗體的標記
實驗10 異硫氰酸熒光素標記IgG抗體
實驗11 R-藻紅蛋白標記IgG抗體
實驗12 辣根過氧化物酶標記IgG抗體
實驗13 生物素標記IgG抗體

第二篇 利用標記抗體進行的檢測
一、免疫熒光法
實驗14 直接免疫熒光法標記人T細胞
實驗15 間接免疫熒光法檢測大腸杆菌
實驗16 免疫熒光法顯示細胞的微管
二、酶免疫測定
實驗17 間接ELISA檢測兔抗羊IgG抗體效價
實驗18 夾心ELISA法檢測小鼠血清IL.2
實驗19 酶聯免疫斑點試驗檢測IFN-y分泌細胞數目
實驗20 ELISPOT法檢測小鼠脾髒抗羊IgG抗體形成細胞數目
實驗21 應用免疫組化ABC法檢測小鼠脾髒Thy1.2陽性細胞的分布
實驗22 免疫印跡試驗

第三篇 免疫細胞的分離與鑒定
一、免疫細胞分離
實驗23 密度梯度離心法分離外周血單個核細胞
實驗24 Percoll不連續密度梯度離心法分離NK細胞
實驗25 小鼠脾髒淋巴細胞分離及活率測定
實驗26 腫瘤浸潤淋巴細胞的製備
實驗27 黏附法分離單核細胞和淋巴細胞
實驗28 尼龍毛柱法分離T細胞與B細胞
實驗29 E.花環形成法從單個核細胞中分離T細胞
實驗30 免疫磁珠分選法分離小鼠脾髒CD4+T淋巴細胞
實驗31 流式細胞儀檢測小鼠IFN-'y分泌細胞
實驗32 小鼠髓源性DC的分離及誘導培養
二、免疫細胞鑒定

第四篇 機體免疫功能檢測
一、細胞吞噬相關功能檢測
實驗33 體外試管法檢測小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗
實驗34 中性紅法檢測小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能
實驗35 利用流式細胞儀檢測巨噬細胞吞噬活性
實驗36 巨噬細胞一氧化氮産生量的測定
實驗37 中性粒細胞呼吸爆發的檢測
二、細胞增殖及活力檢測
實驗38 MTT比色法檢測淋巴細胞活力
實驗39 ATP生物熒光檢測法檢測抗癌藥物對腫瘤細胞活力的影響
三、細胞介導的細胞毒試驗
實驗40 51Cr釋放試驗
實驗41 乳酸脫氫酶釋放試驗
實驗42 塗片染色法檢測凋亡細胞
實驗43 AnnexinV-FITC/PI雙染色法檢測凋亡細胞
實驗44 凋亡細胞DNA電泳
實驗45 TUNEL技術檢測凋亡細胞
四、APC抗原提呈功能分析
實驗46 樹突狀細胞抗原提呈能力檢測
五、免疫球蛋白的定量
實驗47 單嚮免疫擴散法檢測小鼠血清IgG、IgM、IgA
實驗48 夾心ELISA法檢測小鼠腸液中分泌型IgA水平
六、補體的細胞毒作用檢測
實驗49 補體的細胞毒作用檢測
參考文獻

附錄一 常用溶液配製方法
附錄二 荷瘤小鼠模型建立方法
一、腹水瘤小鼠模型建立方法
二、小鼠移植性實體瘤模型的建立
附錄三 南京大學生命科學學院本科生免疫學實驗教學內容及安排

精彩書摘

　　三、抗體的純化
　　在許多情況下我們需要用純化抗體進行研究及檢測。
　　抗體有多種來源。單剋隆抗體可從雜交瘤細胞培養上清液中純化；多剋隆抗體可從血清中純化；基因重組抗體因錶達係統不同可存在於錶達受體細胞培養液或細胞內，且胞內錶達往往以聚集、無活性的包含體的形式存在。胞外可溶性錶達抗體可直接純化，胞內包含體形式的抗體純化後還需要通過復性使其轉變為活性形式。
　　基於抗體的來源及純度要求不同，抗體純化方法也不同。一般應綜閤考慮産量和純度，盡可能用較少的純化步驟獲得較高純度的目標蛋白。沉澱法是一種快速但純度不高的純化方法，一般用高濃度鹽溶液使抗體沉澱而與溶液中的脂類、碳水化閤物、核酸、低分子質量蛋白質等物質分開。這種用鹽沉澱蛋白的方法也稱為鹽析法，常常用在蛋白純化的起始階段。除瞭鹽，也用一些多聚物（如PEG）及有機溶液沉澱蛋白質。
　　抗體純化的傳統方法在鹽析法之後常常還包括好幾個步驟，但現在普遍使用的親和層析法可使純化步驟大為減少，甚至隻需一步就可獲得高産量和高純度的目標抗體。該法利用抗體與固定在膠基質上的特定配體的特異、可逆結閤將抗體與溶液中其他物質分開，是獲得純淨抗體的理想方法，分離純度可達99%，産量可達10%-50%。親和配體若是與某種抗體同種型結閤的蛋白A和蛋白G，得到的純化抗體即為某種同種型抗體，如IgG、IgM或IgA；親和配體若為特定抗原，得到的抗體即為抗原特異性抗體。
　　在抗體純化過程中，目標抗體的監測非常重要。一個快速、簡單的蛋白濃度監測方法是在280nm波長處進行光度測量。要進行抗體的特異監測，可應用ELISA法、SDS-PAGE法或WesternBlot法。
　　實驗7鹽析法純化免疫球蛋白
　　利用一定濃度的鹽溶液使混閤蛋白溶液中某種蛋白質成分析齣而得到純化的蛋白質的純化方法通常稱為蛋白質的鹽析。是一種快速但所得蛋白純度不高的蛋白粗提方法。
　　硫酸銨、硫酸鈉、硫酸鎂、氯化鈉等鹽都能使蛋白質發生鹽析。硫酸銨因其在水中溶解度高且受溫度影響較小而最常應用。一般認為，在pH7.0時，50%的飽和硫酸銨可將所有的免疫球蛋白都沉澱齣來；33%飽和度時，大部分IgG可沉澱齣來；40%飽和度時，IgG沉澱物的得率最高，但含p球蛋白部分增多。
　　……

前言/序言

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