破壞性蛋白質提取的方法是細胞壁蛋白提取的第二個主要途徑,並且這個方法也應用瞭質壁分離。在用含有甘油和甘露醇的溶液處理擬南芥的懸浮細胞係後,將細胞通過一個N2破碎彈隨後細胞碎片被恢復並且通過顯微鏡檢查。從準備的細胞壁材料中用2%的十二烷基硫酸鈉(SDS)提取蛋白質並用Western雜交分析汙染的胞內蛋白。作為非破壞性的方法,汙染是一個重大的問題,因此必須保證細胞壁的純度。
评分瀋世華,中國科學院植物研究所研究員,博士生導師。兼任中國科學院唐山高新技術研發與轉化中心工程植物事業部部長,中國植物生理學會植物生物質與生物能源專業委員會委員。
评分書質量很好,非常的滿意
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评分 评分在同一組發錶的兩篇文獻中擬南芥懸浮細胞的勻漿液也被用來作為一個細胞壁蛋白質的來源[12,13]。在這兩種情況下,細胞洗滌、過濾,並通過細胞破壞器。這些勻漿在甘油溶液中被分層並且通過重力沉澱後細胞壁組分被收集和洗滌。純化的細胞壁由電子顯微鏡檢查並且通過免疫熒光和免疫雜交檢測汙染的胞內或膜蛋白[12]。結果支持瞭作者的結論:細胞壁組分沒有汙染的蛋白質。在這兩個文件中,細胞壁組分中的蛋白質先用0.2mol/L氯化鈣提取然後用尿素緩衝液。
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评分另一種從活細胞中洗脫細胞壁的蛋白質的方法是利用質膜的質壁分離使質膜萎縮脫離細胞壁。Borderies等[10]用活擬南芥懸浮培養細胞來提取細胞壁鬆散結閤的蛋白質。培養物首先用50%甘油質壁分離,然後相繼用不同的緩衝液提取。利用兩種不同的提取體係——NaCl、EDTA、0.2mol/LCaCl2或NaCl、EDTA、2mol/LLiCl來優化方法並且減少提取處理所造成的膜滲透的問題。這些處理中的幾個導緻細胞壁蛋白汙染上胞內蛋白,因此要利用透射電子顯微鏡來驗證質膜的完整性。
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