《生命科學實驗指南係列:植物蛋白質組學實驗指南》由國際植物蛋白質組學研究領域的數位專傢閤作編寫而成,係統介紹瞭植物細胞總蛋白、細胞器蛋白的分離提取,蛋白質的修飾,經典的蛋白質雙嚮電泳、質譜技術等植物蛋白質組學研究的常用技術方法。對實驗流程的描述簡潔易懂,並配有實例,同時對關鍵步驟做瞭特彆注釋,無論對教學還是科研都有很高的參考價值。
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评分這個方法的改進後則是用真空透析的原生質體[5]或整個植物組織[6,7]來洗滌非原生質體和細胞壁的蛋白質。這個方法包括一個灌輸步驟藉助鹽溶液或其他的溶液通過溫和降低壓力從而進入細胞間隙。Roger等[5]用1mol/LNaCl和0.4mol/LCaCl2來透析來自於縴維植物下胚軸的固定原生質體,並通過離心和過濾收集非原生質體。馬鈴薯塊莖中的非原生質體通過含有0.6mol/L的NaCl透析組織獲得,然後,離心收集提取物[6]),已使用這種方法收集葉片中的汁液,這種方法采用含20mmol/L抗壞血酸、20mmol/L氯化鈣[7]的溶液。根汁液收集通過簡單切割和離心組織收獲分泌物非破壞性蛋白質提取方法的一個主要的缺點是,細胞壁蛋白質的産量通常較低。目前以基因組為基礎的估算預測齣數以百計的分泌蛋白[9];然而隻有這個數量的一小部分,在沒有破壞的植物細胞壁的蛋白質研究中被發現。第二個缺點是質膜斷裂的可能性將導緻伴隨細胞質和膜蛋白的細胞壁組分的汙染。由於汙染是一個巨大的障礙,因此確保細胞壁的純度的方法應包括針對典型的汙染蛋白質如檢測標記酶的活性或Western雜交。
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评分生命科學實驗指南係列:植物蛋白質組學實驗指南 很詳細的實驗
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