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內容簡介

　　

　　《診斷微生物學新技術》由兩個重要部分組成：（1）技術篇；（2）應用篇。第一部分：係統、詳細地介紹目前用於臨床微生物學檢測的各種新技術，包括自動化血培養、快速抗原試驗、抗體檢測、基於流式細胞儀的抗生素耐藥檢測技術、實時細胞分析技術、基於脂肪酸的微生物鑒定和藥敏試驗、基於MALDI-TOF質譜技術的微生物鑒定、各種分子診斷技術如體外核酸擴增技術、PCR及其衍生技術、非PCR靶擴增技術、探針擴增技術、信號擴增技術、實時核酸定量技術、擴增産物檢測技術、直接核酸測序技術、芯片技術、基於非放大探針的微生物檢測和鑒定、分子分型技術、PCR/電噴霧電離質譜等先進技術的原理、方法和特點，為這些新技術在臨床微生物學中的應用提供堅實的技術基礎。第二部分：重點介紹上述新技術在臨床微生物檢驗中的應用，包括細菌快速鑒定和藥敏試驗等。

目錄

原著作者寄語
序言一
序言二
序言三
譯者的話

第一篇 技術篇
第一章 自動化血培養
第二章 呼氣試驗檢測幽門螺鏇杆菌和麯黴菌
第三章 快速抗原檢測
第四章 抗體檢測的原理及應用
第五章 流式細胞技術在抗生素耐藥檢測的應用
第六章 以生化反應為基礎的微生物鑒定係統
第七章 感染性疾病生物標誌物：非抗體依賴性宿主應答
第八章 采用實時細胞功能分析係統進行微生物和病毒感染的功能檢測
第九章 基於細胞脂肪酸的微生物鑒定和藥敏試驗
第十章 MALDI—TOF質譜技術在微生物鑒定中的應用
第十一章 核酸提取技術
第十二章 非擴增核酸探針技術在微生物檢測和鑒定中的應用
第十三章 最先進的分子分型技術
第十四章 體外核酸擴增技術
第十五章 PCR及其衍生技術
第十六章 非PCR靶核酸擴增技術
第十七章 探針擴增技術
第十八章 信號擴增技術
第十九章 實時定量核酸分析
第二十章 擴增産物檢測技術
第二十一章 凝膠電泳、DNA印跡和微孔闆比色係統
第二十二章 直接核苷酸測序鑒定擴增産物
第二十三章 微陣列擴增産物的檢測與鑒定
第二十四章 利用熒光淬滅或能量轉移機製實時檢測擴增産物
第二十五章 電離質譜技術鑒定微生物核酸擴增産物
第二十六章 PCR擴增産物滅活

第二篇 應用篇
第二十七章 通用基因擴增和測序技術在細菌鑒定中的應用
第二十八章 血液和血液製品的分子篩查技術
第二十九章 性傳播疾病的分子診斷
第三十章 結核分枝杆菌診斷和耐藥性檢測新進展
第三十一章 快速篩查和鑒定耐甲氧西林金黃色葡萄球菌
第三十二章 食源性病原體的最新檢測方法
第三十三章 床旁即時分子診斷的技術與應用
第三十四章 微生物感染的分子鑒彆診斷：多重PCR的方法，應用和技術平颱
第三十五章 微生物診斷技術在獸醫學領域的進展
第三十六章 獸醫診斷病毒學最新進展：來自世界動物衛生組織閤作中心的報告
第三十七章 深度測序：技術進展與臨床微生物學應用
第三十八章 診斷病毒學中病毒RNA剪接的測定
第三十九章 應用基因芯片檢測和鑒定臨床重要真菌
第四十章 艱難梭菌的實驗室檢測技術進展
第四十一章 HIV感染的分子診斷：當前發展狀況
第四十二章 微球懸浮陣列法檢測和鑒定呼吸道病毒
第四十三章 人乳頭狀瘤病毒感染的分子診斷與監測
第四十四章 分子檢測在膿毒癥實驗室診斷中的作用
第四十五章 檢測新發感染病原體的先進病理學技術
第四十六章 利用宿主和微生物microRNA譜診斷及評價微生物感染
第四十七章 先進技術檢測結果的解讀和臨床相關性

精彩書摘

　　《診斷微生物學新技術》：
　　二、DNA印跡技術的原理
　　DNA印跡技術是用於檢測樣品中特定DNA序列的分子生物學方法。DNA印跡技術結閤瞭凝膠電泳和探針雜交的方法。片段大小和探針序列被用於決定結果的特異性。根據分子大小在瓊脂糖凝膠電泳上分離待測DNA。然後，凝膠上帶負電荷的DNA條帶被轉移到帶正電荷的膜上。轉移前，有時需要用酸處理DNA凝膠，使大於15 kb的DNA被打斷為小片段，使得DNA從凝膠嚮膜的轉印更有效。一些研究也用堿性溶液處理DNA凝膠，堿性環境可以提高帶負電荷的DNA結閤到帶正電荷的膜的效率，同時使DNA變性成單鏈用於後續的雜交。轉印過程是將凝膠放置在緩衝液飽和的濾紙上方，然後將硝酸縴維素膜或尼龍膜放置在凝膠上方（或若用電轉移，朝嚮帶正電的方嚮），最後在膜的上方放一些乾濾紙。
　　壓力需均勻地施加在凝膠上，以確保凝膠和膜之間良好和充分的接觸。由於毛細管的虹吸作用，緩衝液通過底部濾紙將凝膠中的變性DNA移動至硝酸縴維素膜或尼龍膜上。這個過程需要幾個小時纔能完成。DNA條帶在膜上的相對位置與凝膠上一緻，在分辨率上有最小的損失。之後，將膜放置在真空或普通烤箱中80℃烘烤2h（標準條件，硝酸縴維素膜或尼龍膜）或用紫外綫照射（尼龍膜），使轉移的DNA永久性地固定在膜上。單鏈DNA對於硝酸縴維素膜有較強的親和力，因此放射性或染料標記的探針能夠結閤到膜上的結閤位點。為瞭防止非特異性結閤，用含鮭魚或鯡魚精子DNA、濃度各為0.2%的聚蔗糖（蔗糖的人造聚閤物，Ficoll）、聚乙烯吡咯烷酮和牛血清白蛋白的溶液處理膜。這種預雜交液也常常用於雜交反應。DNA探針標記一段特定的與待測DNA片段互補的單鏈DNA片段以檢測待測DNA是否存在。將膜與雜交探針一起孵育，探針與互補DNA序列結閤，標記的探針顯示齣特定DNA片段的存在和位置。為瞭確保探針與樣本DNA結閤的特異性，最常用的雜交方法采用去離子甲酰胺和去垢劑如SDS來減少探針的非特異性結閤。雜交後，用SSC緩衝液洗去膜上的未結閤探針，如果采用的是放射性探針或熒光探針，則通過放射自顯影的方法在X膠片上顯示雜交的情況，如果采用顯色的方法，則通過在膜上顯色來讀取結果。傳統的DNA印跡是一個復雜的過程，並不適閤快速分子診斷的需要和發展趨勢，也沒有被用於診斷。但是DNA雜交的技術和原理被用來發展很多現代的技術，如本章後麵要介紹的微孔闆法和另一章要介紹的基因芯片技術。
　　盡管我們這裏討論的凝膠電泳和DNA印跡技術並不是常用的分子診斷技術，但這兩個技術被用於發展很多現代分子診斷方法。對臨床醫生和感染病性疾病專傢而言，瞭解這兩項技術的基本原理、操作過程和局限性有助於他們更好地解釋檢測結果。
　　……

前言/序言

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