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內容簡介

　　《生命科學實驗指南係列：精編細胞生物學實驗指南》內容翔實全麵，主要包括：細胞培養、細胞的製備與分離、亞細胞組分分離和細胞器分離、抗體、顯微鏡技術、細胞蛋白質的特性、電泳與免疫印跡、蛋白標記和免疫沉澱、蛋白質的磷酸化作用、蛋白質轉運，以及細胞增殖、衰老和死亡、體外重建、細胞黏附和細胞外基質、細胞的能動性、細胞器運動。全書還附有各種實用信息和數據，包括試劑與溶液的配製、細胞生物學研究中常用的藥物概要和各種常用技術的介紹等。

內頁插圖

目錄

譯者序
前言
第1章 細胞培養
單元1．1 哺乳動物細胞培養的基本方法
基本方案單層細胞的胰酶消化和傳代
備擇方案懸浮培養的細胞傳代
支持方案1 人單層貼壁細胞的凍存
支持方案2 懸浮細胞的凍存
支持方案3 人細胞係的解凍與復蘇
支持方案4 用血細胞計數闆和颱盼藍染色法測定細胞數目及活性
支持方案5 細胞運輸的準備
單元1．2 適於哺乳動物細胞的培養基
基本方案1 製備含血清的培養基
基本方案2 製備血清減量或無血清培養基
基本方案3 HAT選擇培養基的製備
基本方案4 轉化細胞在軟瓊脂中的生長
支持方案1 培養基中pH的調節
支持方案2 抗生素在培養基中的應用
單元1．3 細胞培養的無菌技術
基本方案1 無菌技術
基本方案2 層流式超淨颱的使用
單元1．4 滅菌和過濾
基本方案1 液體的高壓滅菌
備擇方案乾燥物品的高壓消毒
基本方案2 乾熱滅菌和清除熱原法
基本方案3 消毒劑的應用：70%乙醇
溶液的過濾除菌
基本方案4 真空過濾
基本方案5 小體積非水溶性液體的正壓過濾
單元1．5 確定和控製細胞培養的微生物汙染
基本方案1 細菌和真菌汙染的檢測
基本方案2 直接培養法檢測支原體汙染
基本方案3 應用抗生素控製微生物汙染
單元1．6 酵母培養及培養基
培養基的製備
酵母培養的綜閤考慮

第2章 細胞的製備與分離
單元2．1 成縴維細胞培養的建立
基本方案
單元2．2 人淋巴細胞的製備和培養
基本方案1 通過高分子質量的蔗糖一泛影鈉（Ficoll-Hypaque）梯度離心製備淋巴細胞
基本方案2 從淋巴細胞群裏製備單核／巨噬細胞和樹突狀細胞
基本方案3 通過包被在磁珠錶麵的單剋隆抗體分選T細胞和B細胞
單元2．3 人臍靜脈內皮細胞的製備
基本方案
單元2．4 轉染EB病毒産生永生的B細胞株
基本方案
單元2．5 激光捕獲顯微切割
基本方案從組織切片中分離一種純的細胞群
支持方案蘇木素和伊紅染色組織的激光顯微切割

第3章 亞細胞組分分離和細胞器分離
單元3．1 細胞組分分離概述
單元3．2 分離大鼠肝細胞質膜片層與漿膜結構域
基本方案1 分離質膜片層
支持方案1 檢測堿性磷酸二酯酶I的活性
基本方案2 分離質膜結構域
支持方案2 K+激活的對硝基苯酚磷酸酯酶活性測定實驗
支持方案3 5'-核苷酸酶活性測定實驗
支持方案4 間接免疫熒光法檢測與質膜片層相連的蛋白質
單元3．3 利用差速及密度梯度離心法從組織和細胞中分離Golgi膜
基本方案1 利用蔗糖密度篩從大鼠肝髒中快速分離Golgi膜
基本方案2 將大鼠肝髒提取的輕綫粒體組分懸浮於非連續的蔗糖梯度液中來分離Golgi膜
基本方案3 將培養的細胞懸浮於非連續的蔗糖梯度液中來分離Golgi膜
基本方案4 用自發形成梯度的IODIXANOL梯度液從肝細胞微粒體組分中分離Golgi膜
支持方案 測定UDP-半乳糖半乳糖基轉移酶
單元3．4 利用差速離心及密度梯度離心從組織及細胞中分離溶酶體
基本方案1 使用自發形成梯度的PERCOLL梯度液從大鼠肝髒中分離溶酶體
基本方案2 利用自發形成梯度的PERCOLL梯度液從培養的人HL-60細胞中分離溶酶體
支持方案1 酸性磷酸酶的測定
……
第4章 細胞生物學研究的工具——抗體
第5章 顯微鏡術
第6章 細胞蛋白質的特性
第7章 電泳與免疫印跡
第8章 蛋白標記和免疫沉澱
第9章 蛋白質的磷酸化作用
第10章 蛋白質轉運
第11章 細胞增值，細胞衰老和細胞死亡
第12章 體外重建
第13章 細胞黏附與細胞外基質
第14章 細胞的能動性
第15章 細胞器運動
附錄
參考文獻
索引

前言/序言

　　細胞生物學的研究體係日益擴大。要想領略這種擴展，途徑之一便是去參加本領域的重要會議，諸如美國細胞生物學學會（American Society for CellBiology）的年會。你可以悠閑地漫步於大廳的展闆區，甚至於都不必駐足於某一版麵，就可以深刻感受到細胞生物學範疇之遼闊。對於那些在過去一二十年間經常光顧這種展廳的人們來說，細胞生物學的這種動態態勢以及這種爆發性的發展是毫不奇怪的——在愈來愈多的研究體係中隻能是愈來愈多。以往展闆區域主要由細胞的畫麵主宰，這些細胞都經由電子顯微鏡學傢的固定（很呆闆地），並且隻是以黑白兩色顯示齣來。雖然電子顯微鏡目前對於我們瞭解細胞構築仍然有貢獻，但新近展闆區已齣現一排排活細胞的電腦增晰視頻影像（computer-enhanced video images），這些細胞均經過不完全活性染色纔顯示，諸如羅丹明紅（rhodamine red）、熒光素綠（fluorescein green）以及被稱作綠色熒光蛋白的特異綠色等。冰凍蝕刻的加入則以冷凍定幀法（freeze frame）來展現細胞。此外在視頻影像間還散在有另一些展闆，它們詳細記錄瞭眾多細胞成分的分子特徵。還有一些展闆報道瞭用基因削減或基因敲除顯示的有關它們功能的新近發現。正如羅盤的星點有其應有的位置一樣，酵母、果蠅和蠕蟲的遺傳學研究興旺於一方，而在細胞生物學基礎研究和臨床醫學之間架設橋梁的研究也在另一方不斷地湧現。
　　很顯然，今天稱自己為細胞生物學傢的科學傢乃是一個多學科群體，這種多學科性質隱藏著巨大的學術價值。那些曾經將研究學科分隔開來的邊界如今已逐漸消失，細胞生物學傢也已贊同沒有哪一種單獨的途徑可以揭開細胞的奧秘。新技術和新技術學隨著試驗成真並肩而至，並且用作細胞生物學在本領域開拓的工具。正是細胞生物學的這一麵目的變化以及其代錶巨大挑戰的方法學共同促成瞭《精編細胞生物學實驗指南》的問世。本書要闡述的一個基本問題是，在細胞生物學領域裏應在何處劃齣其邊界。我們的決定是拒絕劃齣這種邊界，因為它們完全是人為的，並且，糟糕的是，會産生反效果。相反，我們企圖努力彌閤該領域的多樣性。本指南要包括那些對細胞生物學傢仍有價值的“經典的”方法，也要提供旨在成為今後之經典的程序。
　　我們沒有理由懷疑細胞生物學的研究領域隨時都會很快地停滯。事實上，一名細胞生物學傢之所以激勵不已，部分地齣於革新和新發現所帶來的不間斷的驚奇。為此，我們這一專業需要一些可靠的、便於使用的，而且還要反映齣該領域擴展的實驗方法學的資料。為瞭符閤這一要求，我們收集瞭覆蓋細胞生物學眾多方麵的一係列實驗方案，雖然這一套方案還不完全，但可以認為它是一個“初學者工具箱”，包括有許許多多我們這一專業中最常用和必需的工具。
生命科學實驗指南係列：精編細胞生物學實驗指南 [Short Protocols in Cell Biology] 下載 mobi epub pdf txt 電子書

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