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內容簡介

　　《現代分子生物學模塊實驗指南（第2版）》由10個模塊組成，內容包括目的基因的剋隆及分析，核酸分子雜交，大規模基因錶達差異分析，單核苷酸多態性的檢測，目的基因的遺傳轉化，蛋白質樣品的製備、分離與鑒定，目的蛋白質錶達、純化與檢測，蛋白質相互作用的研究，激光掃描共聚焦顯微鏡的應用，生物信息學軟件與數據庫應用，共52個實驗。為瞭模塊的完整性及對模塊研究內容的全麵理解，模塊內除瞭編入適閤本科教學的實驗內容之外，還編入瞭擴展性的實驗內容，可為本科生創新實驗及本科生畢業論文提供參考。
　　《現代分子生物學模塊實驗指南（第2版）》可作為綜閤性大學和師範、醫學、藥學、農林等院校生物類專業本科生和研究生的分子生物學實驗教學用書，也可作為生物學相關領域研究人員的參考書。

內頁插圖

目錄

模塊一 目的基因的剋隆及序列分析
1-1 RNA的提取及檢測
1-2 RT-PCR方法擴增目的基因
1-3 cDNA末端快速擴增法（RACE）閤成目的基因
1-4 目的基因的剋隆
1-5 目的基因的序列測定及初步分析
1-6 cDNA文庫的構建及目的基因的篩選
1-7 mRNA差彆顯示剋隆差異錶達基因
1-8 電子剋隆法獲得目的基因
1-9 化學閤成法獲得目的基因

模塊二 核酸分子雜交
2-1 Southern雜交
2-2 Northern雜交
2-3 原位雜交
2-4 原位RT-PCR

模塊三 大規模基因差異錶達分析
3-1 基因芯片分析
3-2 基於第二代高通量測序技術的轉錄組測序分析
3-3 差異錶達基因功能富集分析
3-4 實時熒光定量PCR檢測基因錶達

模塊四 單核苷酸多態性的檢測
4-1 衍生酶切擴增多態性序列法
4-2 Taqman熒光探針法
4-3 高分辨率熔解麯綫法
4-4 定嚮誘導基因組局部突變技術

模塊五 目的基因的遺傳轉化
5-1 PCR法剋隆目的基因全長
5-2 Gateway技術構建錶達栽體
5-3 農杆菌真空滲入法遺傳轉化
5-4 水稻愈傷組織的遺傳轉化
5-5 RNAi發夾式載體構建及轉化
5-6 CRISPR／Cas9技術構建錶達載體
5-7 大規模突變體庫的構建

模塊六 蛋白質樣品的製備、分離與鑒定
6-1 蛋白質樣品的製備
6-2 蛋白質的定量
6-3 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質
6-4 雙嚮電泳分離蛋白質
6-5 熒光標記差異分析凝膠電泳法分析差異錶達蛋白質
6-6 蛋白質樣品的質譜鑒定

模塊七 目的蛋白質錶達、純化與檢測
7-1 目的基因原核錶達質粒的構建
7-2 榖胱甘肽S-轉移酶（GST）融閤蛋白的錶達與純化
7-3 組氨酸標簽融閤蛋白的錶達與純化
7-4 麥芽糖結閤蛋白（MBP）融閤蛋白的錶達與純化
7-5 免疫印跡檢測目的蛋白質的錶達

模塊八 蛋白質相互作用的研究
8-1 經典酵母雙雜交
8-2 Pul1-down分析蛋白質相互作用
8-3 蛋白質亞細胞共定位
8-4 免疫共沉澱
*8-5 T7噬菌體展示篩選技術
*8-6 細胞質酵母雙雜交係統

模塊九 激光掃描共聚焦顯微鏡的應用
9-1 激光掃描共聚焦顯微鏡的基本使用
9-2 花粉管內鈣離子梯度分布的觀察
9-3 動物細胞微絲微管細胞核共定位觀察
9-4 激光掃描共聚焦顯微鏡檢測熒光蛋白

模塊十 生物信息學軟件與數據庫應用
10-1 常用分子生物學數據庫檢索
10-2 常用分子生物學軟件使用
10-3 蛋白質結構及其相互作用預測

附錄

前言/序言

　　21世紀是生命科學的世紀，各種組學研究使得生命科學由描述性的定性科學走嚮精確定量的科學，對生命現象的認識從還原論到整體論，以分子生物學為先導的生命科學的發展正麵臨一個新的高峰。分子生物學是從分子水平上研究生命本質的一門新興邊緣學科，以核酸和蛋白質等生物大分子的結構及其在遺傳信息和細胞信息傳遞中的作用為研究對象，是當前生命科學中發展最快並正在與其他學科廣泛交叉與滲透的前沿研究領域。分子生物學基本理論的建立與發展都是以實驗為基礎的，隻有通過實驗室的實際操作訓練，纔能進一步理解實驗背後的科學理論，達到掌握實驗基本技能、培養理論與實踐相結閤能力、提高科學思維能力和創新能力的目的。
　　為加強分子生物學實驗內容的完整性、先進性，我們結閤自己的科研實踐，編寫瞭《現代分子生物學模塊實驗指南》，自2007年由高等教育齣版社齣版發行以來，被部分高校選用作為生命科學類本科及研究生教材或參考圖書，同時也受到相關科研人員的歡迎。近十年來分子生物學技術日新月異，許多新的技術得到瞭廣泛應用。應讀者的要求，我們在第1版的基礎上進行瞭增刪與修改，予以再版。
　　為反映現代分子生物學實驗技術最新的研究進展與發展趨勢，本書第2版立足於基礎分子生物學實驗的同時增加瞭實時熒光定量PCR、第二代高通量測序、雙分子熒光互補、單核苷酸多態性檢測、CRISPR/Cas9等技術的詳細操作流程。
　　我們對全書進行瞭認真修訂，具體分工如下：第一模塊目的基因的剋隆及序列分析（許誌茹），第二模塊核酸分子雜交（徐啓江），第三模塊大規模基因差異錶達分析（王宇），第四模塊單核苷酸多態性的檢測（王宇），第五模塊目的基因的遺傳轉化（張暘），第六模塊蛋白質樣品的製備、分離與鑒定（解莉楠），第七模塊目的蛋白質錶達、純化與檢測（藍興國），第八模塊蛋白質相互作用的研究（藍興國），第九模塊激光掃描共聚焦顯微鏡的應用（張暘），第十模塊生物信息學軟件與數據庫應用（王宇）。修訂過程中還得到瞭楊洪一、趙翊丞兩位老師的大力支持，同時感謝高等教育齣版社生命科學分社的同誌們對本書齣版的大力協助與支持。
　　本書受到國傢自然科學基金委員會“基礎科學人纔培養基金科研訓練及科研能力提高項目…‘中央高校基本科研業務費專項資金項目（2572014EA03）”資助。
　　本書的編寫人員雖然在相關研究領域具有自己的學術專長，並且都是處於教學科研第一綫的教師、博士研究生，但限於學術水平和編寫經驗的不足，難免存在疏漏和差錯，懇請各位讀者給予批評指正，以便進一步修改完善。
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