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內容簡介

　　《生命科學實驗指南係列：精編分子生物學實驗指南（第5版 套裝上下冊）》是知名度很高、不斷更新的《Current Protocols in Molecular Biology》係列的精編版本。新版對原有內容進行瞭修訂和更新，包括：大腸杆菌、質粒和噬菌體，DNA的製備和分析，DNA和RNA的酶學操作，RNA的製備和分析，重組DNA文庫的構建，重組DNA文庫的篩選，DNA序列測定，剋隆化DNA的誘變，DNA導入哺乳動物細胞，蛋白質分析，免疫學，DNA-白質相互作用，釀酒酵母，原位雜交和免疫組織化學，聚閤酶鏈反應，蛋白質的錶達，蛋白質磷酸化的分析，生物信息學，蛋白質相互作用的分析等；又新增瞭染色質的裝配與分析，核酸陣列，組閤文庫的建立和使用，單個細胞或一群細胞間差異錶達基因的發現和分析四章內容。
　　《生命科學實驗指南係列：精編分子生物學實驗指南（第5版 套裝上下冊）》可供高等院校和科研機構從事分子生物學研究的科研工作者和研究生參考。

內頁插圖

目錄

譯者序
前言

第1章 大腸杆菌、質粒和噬菌體
1．1 培養基的製備及細菌學工具
1．1．1 極限培養基
1．1．2 豐富培養基
1．1．3 固體培養基
1．1．4 實驗工具
1．2 在液體培養基中培養
1．2．1 基本方案1過夜培養
1．2．2 基本方案2大體積培養
1．2．3 基本方案3利用計數闆監測生長情況
1．2．4 基本方案4利用分光光度計監測生長情況
1．3 固體培養基上培養
1．3．1 基本方案1通過連續稀釋法滴定和分離細菌菌落
1．3．2 基本方案2通過平闆劃綫法分離單菌落
1．3．3 基本方案3通過鋪平闆分離單個菌落
1．3．4 基本方案4影印平闆
1．3．5 輔助方案菌株的保存和復蘇
1．4 經典細菌遺傳學選論
1．5 質粒載體
質粒載體的選擇
1．6 質粒DNA的小量製備
1．6．1 基本方案1堿裂解小量製備
1．6．2 備選方案96孔微量滴定闆堿裂解法
1．6．3 基本方案2煮沸小量製備法
1．7 質粒DNA的大量製備
1．7．1 基本方案1堿裂解法製備粗製裂解物
1．7．2 基本方案2氯化銫／溴化乙錠平衡離心法
1．7．3 備擇方案利用陰離子交換層析或分子篩層析純化質粒DNA
1．8 將質粒DNA導入細菌細胞
1．8．1 基本方案CaCl2轉化法
1．8．2 備擇方案一步法製備和轉化感受態細菌
1．8．3 基本方案2高效率的電轉化方法
1．9 入噬菌體概述
1．9．1 裂解性生長
1．9．2 溶源性生長
1．10 作為剋隆載體的入噬菌體
1．10．1 用入噬菌體的優點
1．10．2 選擇插入的DNA
1．10．3 入噬菌體來源的剋隆載體的圖譜
1．11 入噬菌體鋪平闆産生噬斑
1．11．1 基本方案1通過連續稀釋法分離單個噬斑
1．11．2 基本方案2噬菌體轉染和體外包裝構建
1．12 培養入衍生的噬菌體載體
1．12．1 基本方案通過平闆裂解製備噬菌體庫
1．12．2 備擇方案製備液體裂解物
1．13 從噬菌體裂解液中製備入DNA
基本方案通過分級平衡梯度離心製備DNA
1．14 源於絲狀噬菌體的載體
1．15 利用M13噬菌體衍生載體製備單鏈DNA
基本方案利用輔助噬菌體從質粒製備單鏈DNA

第2章 DNA的製備和分析
電泳及其應用
凝膠和電路
2．1 水溶液中DNA的純化和濃縮
2．1．1 基本方案DNA的酚抽提和乙醇沉澱
2．1．2 備擇方案1異丙醇沉澱DNA
2．1．3 輔助方案1丁醇濃縮DNA
2．1．4 輔助方案2醚抽提法去除殘存酚、氯仿或丁醇
2．1．5 備擇方案2矽膜離心柱法純化DNA
2．1．6 備擇方案3RNA及DNA稀溶液的純化和濃縮
2．1．7 備擇方案4乙醇沉澱法去除低分子質量的寡核苷酸和核苷三磷酸
2．2 陰離子交換色譜法純化DNA
基本方案
2．3 從哺乳動物組織中製備基因組DNA
基本方案
2．4 從植物組織中製備基因組DNA
2．4．1 基本方案氯化銫離心法製備植物DNA
2．4．2 備擇方案CTAB製備植物DNA
2．5 從細菌中製備基因組DNA
2．5．1 基本方案細菌基因組DNA的小量製備
2．5．2 備擇方案氯化銫法大規模製備細菌基因組DNA
……
第3章 DNA和RNA的酶學操作
第4章 RNA的製備和分析
第5章 重組DNA文庫的構建
第6章 重組DNA文庫的篩選
第7章 DNA序列測定
第8章 剋隆化DNA的誘變
第9章 DNA導入哺乳動物細胞
第10章 蛋白質分析
第11章 免疫學
第12章 DNA-蛋白質相互作用
第13章 釀酒酵母
第14章 原位雜交和免疫組織化學
第15章 聚閤酶鏈反應（PCR）
第16章 蛋白質的錶達
第17章 蛋白質磷酸化的分析
第18章 生物信息學
第19章 蛋白質相互作用的分析
第20章 染色質的裝配與分析
第21章 核酸陣列
第22章 組閤文庫的建立和使用
第23章 單個細胞或一群細胞間差異錶達基因的發現和分析

附錄
索引

前言/序言

　　分子生物學已經發展成熟，並且實驗研究已經進展到如此狀態——以前特殊的實驗程序，現在已成為常規操作——因此，《精編分子生物學實驗指南》（Short Protocols in Molecular Biology，以下簡稱《精編》）的範圍和概念也在不斷改變。某些內容一度被認為對一般的讀者顯得過於復雜，如組閤化學或染色質裝配和分析，現在已被有規律地應用。基於這樣的思考，我們增加瞭新的章節，並擴展瞭《精編》原有主題下的內容。
　　與前麵的版本一樣，兩捲本的《精編分子生物學實驗指南》第五版是已齣版的《最新分子生物學實驗方法匯編》（Current Protocols in Molecular Biology，以下簡稱《匯編》）一書中的實驗方法的簡編版本。它由《匯編》的核心手冊和每季度更新的服務手冊中提煉而來，涵蓋瞭《匯編》中所有基本方法及其詳細實驗步驟。本書擬作為實驗室手冊使用，對象是那些熟悉《匯編》中各種詳細解釋的研究生和博士後人員，然而，在本書中對實驗方法有詳細的步驟說明，有經驗的研究人員也可將本書作為獨立的實驗室操作指南。
　　雖然熟練掌握本書中的技術方法可使讀者進行分子生物學和相關學科研究，但本書並不適用於替代研究生水平的分子生物學教材或作為這一領域的綜閤性讀本。另外，我們推薦讀者在使用本書時要對照參考《匯編》中的評述和詳細注釋。最後，我們極力要求讀者通過在分子生物學實驗室中的工作獲得關於基本技術和實驗室安全操作規程的第一手經驗。
　　如何使用這本書
　　結構
　　本書按章編排，每種實驗方案均可從各節中獲得。每一節中列齣材料、實驗方案的步驟和每種技術的參考文獻。在附錄5中囊括瞭整本書全部的參考文獻。本書的排列和結構與《匯編》基本一緻。盡管各節的編號可能不完全相對應，但各節的標題在兩個版本中是相同的。因此，擁有兩種版本的使用者當需要更詳細的解釋時會發現對照參考《匯編》十分容易和便利。
　　在整本書中，許多試劑和實驗程序被反復應用，不過我們並不是反復復製這些信息，而是在章節之間廣泛地進行對照參考。書中前麵各章（和附錄3）主要介紹常用的技術方法，如基本微生物學和酶、DNA、RNA的基本操作方法，而後麵的各章介紹的是更先進的技術方法。因此，在一種方案中無論什麼時候用到某一特定的酶，均可對照參考第3章中適當的節，找到介紹該酶反應條件的內容（如3.5介紹逆轉錄酶）。同樣，在整本書中讀者可參照1.3鋪平闆或在平闆上劃綫；參照2.1進行酚抽提和乙醇沉澱；參照2.6進行瓊脂糖凝膠電泳等。因此，在本書的後麵章節所介紹的方案中就省略瞭製備、純化和分析樣品或目的分子的輔助程序。
　　附錄提供瞭試劑和溶液的配方（附錄1），有用的測量值和數據（附錄2），常用的生物化學實驗技術（附錄3），供應商的名稱和地址（附錄4）。
　　方案
　　許多節中都含有幾組方案。在每個節中首先齣現的是基本方案，它一般也是首選的實驗方法。備擇方案在以下情況下使用：①使用不同的儀器或試劑可得到相似的結果；②起始材料需要方法有所改變；③對最終産物的要求與基本方案不同。輔助方案介紹瞭基本方案和備擇方案所需的附加步驟。這些步驟之所以從核心方案中單列齣來，是因為它們可能在本書中具有其他用途，或操作時與基本方案各步驟在時間上可以分開。
　　試劑與溶液
　　實驗步驟開始之前，材料欄中列齣瞭一個方案中所需要的各種試劑。除培養基和限製性內切核酸酶反應緩衝液配方外，相應的配方都在附錄1中列齣，並在括號中列齣瞭這些配方的齣處。尤其要注意這些特殊溶液中有些溶液的名稱在一個節與另一個節中可能是相似的（如雜交液、裂解緩衝液等），但配方卻不同；因此，在按適當的配方配製試劑時要仔細確認。為瞭避免混淆，在附錄1中緊接每個試劑名稱的括號內列齣瞭使用每個配方的節序數，但常用緩衝液和溶液除外，如TE緩衝液、PBS。
　　【注】本書中實驗方案中所使用的，以及所有試劑和溶液製備所使用的水，均應為去離子蒸餾水。儀器
　　現代分子生物學實驗室中標準儀器及相關用品在本文後列齣，並在本書中廣泛采用。在每個方案之前的材料欄中僅包括“特殊”儀器，即在實驗室不易備有的或需要特殊製備的儀器。
　　供應商
　　在本書的某些實驗中，我們推薦一些化學試劑、生物材料或實驗儀器的供應商。但我們盡量避免這種做法，因為對某種品牌的喜好是主觀的，而且一般並無廣泛比較試驗的基礎。對所推薦的供應商，我們的原則是：這種特殊品牌實際上已被證實具有齣眾的品質；或者，這種材料在市場上很難找到。附錄4列齣瞭推薦的供應商的名稱、地址和電話號碼，但它們並非唯一的生物試劑供應商。讀者也可使用自己喜好的品牌進行實驗。
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