1 基因工程的四大要素及實施要點
1.1 基因工程操作中常用的工具酶
1.2 基因的分離
1.3 基因工程載體
1.4 受體細胞和重組基因的導入
1.5 基因重組的方法
1.6 基因重組體的篩選

2 外源基因在宿主細胞中的高效錶達
2.1 有效的轉錄起始與基因的高效錶達
2.2 mRNA的有效延伸和轉錄終止與基因的高效錶達
2.3 mRNA的穩定性與基因的高效錶達
2.4 有效的翻譯起始與基因的高效錶達
2.5 遺傳密碼應用的偏倚性與基因的高效錶達
2.6 mRNA的二級結構與基因的高效錶達
2.7 RNA的加工與基因的高效錶達
2.8 mRNA序列上終止密碼的選擇
2.9 錶達質粒（或載體）的拷貝數及穩定性與基因的高效錶達
2.10 外源蛋白的穩定性與基因的高效錶達

3 基因的融閤和融閤蛋白的錶達
3.1 利用基因融閤技術錶達外源基因的緣由
3.2 基因融閤的策略
3.3 基因融閤和重組蛋白的産生
3.4 基因融閤和展示篩選
3.5 基因融閤和蛋白分泌
3.6 融閤蛋白的純化
3.7 融閤蛋白的位點特異性切割
附錄重組蛋白錶達和純化中常用的融閤標簽

4 外源基因的分泌錶達
4.1 外源基因在E.coli細胞中的分泌錶達
4.2 外源基因在枯草杆菌中的分泌錶達
4.3 a-因子前導序列介導的酵母細胞分泌係統
4.4 外源基因在哺乳動物細胞中的分泌錶達

5 重組蛋白的正確摺疊及修飾
5.1 重組蛋白的可溶性錶達和摺疊
5.2 重組蛋白的重摺疊
5.3 外源蛋白在翻譯後的修飾

6 幾種真核細胞錶達係統
6.1 哺乳動物細胞錶達係統
6.2 外源基因在哺乳動物細胞中的組成性錶達和誘導性錶達
6.3 核型多角體病毒為載體的昆蟲（細胞）錶達係統
6.4 轉基因動物及其應用
6.5 轉基因植物及其應用
6.6 DNA疫苗

7 分子雜交技術
7.1 探針與目標核酸相互作用的原理
7.2 探針的選擇和特異性
7.3 雜交的速率與探針長度、濃度及雜交加速劑的關係
7.4 雜交的最適條件
7.5 放射性探針的製備
7.6 非放射性探針的製備
7.7 放射性和非放射性標記探針的應用範圍
7.8 DNA微陣列——基因組芯片

8 粒子轟擊和基因轉移
8.1 粒子轟擊技術簡介
8.2 粒子轟擊技術的應用範圍

9 聚閤酶鏈反應及其應用
9.1 聚閤酶鏈反應的原理
9.2 標準的PCR擴增方案
9.3 PCR引物及其設計
9.4 關於熱穩定的DNA聚閤酶
9.5 PCR對模闆質量的要求
9.6 PCR反應緩衝液和循環（周期）數
9.7 PCR相關技術的原理及其應用

10 各種生物學展示技術
10.1 噬菌體展示技術
10.2 細菌展示技術
10.3 酵母展示技術
10.4 核糖體展示技術
10.5 mRNA展示技術

11 基因打靶技術及其應用
11.1 同源重組與基因打靶
11.2 組織特異性的基因打靶
11.3 轉座子介導的基因打靶
11.4 RNA乾涉與基因敲除
11.5 反義核酸技術
11.6 細菌基因敲除方法
11.7 基因打靶技術的應用

12 DNA序列分析
12.1 Sanger的雙脫氧鏈終止測序法
12.2 Maxam-GilbertDNA化學降解法
12.3 關於變性聚丙烯酰胺測序凝膠
12.4 全基因組DNA序列的分析

13 基因突變
13.1 寡核苷酸介導的基因突變
13.2 盒式突變法
13.3 利用PCR進行DNA序列的突變
13.4 關於隨機突變

14 寡核苷酸的化學閤成
14.1 寡核苷酸片段固相閤成的原理及步驟
14.2 寡核苷酸片段的純化及鑒定

15 蛋白質相互作用及其分析方法
15.1 蛋白質相互作用的重要性
15.2 蛋白質相互作用所産生的結果
15.3 蛋白質相互作用的類型
15.4 酵母雙雜交係統
15.5 利用綠色熒光蛋白（GFP）片段重組裝研究蛋白質相互作用——細菌雙雜交法
15.6 蛋白質相互作用分析的in vitro方法

16 蛋白質一核酸相互作用
16.1 研究蛋白質一核酸相互作用的重要性
16.2 蛋白質一核酸相互作用的類型
16.3 蛋白質一核酸相互作用分析的in vitro方法

17 蛋白質工程概述
17.1 蛋白質分子的結構分析
17.2 蛋白質的結構預測與分子設計
17.3 基因工程是實現蛋白質工程的關鍵技術
參考文獻

精彩書摘

　　酵母錶達體係是真核細胞中應用最廣的外源基因錶達體係。作為一種單細胞的低等真核生物，酵母細胞具有對外源蛋白進行翻譯後修飾的能力；由於其對營養要求低、生長快，可通過大規模高密度發酵産業化。利用酵母錶達係統最成功的例子之一是利用酵母錶達係統錶達乙肝病毒錶麵抗原，製造乙肝疫苗，惠及億萬民眾，特彆是兒童。酵母錶達體係有兩種：細胞內錶達和分泌錶達。胞內錶達的長處是重組蛋白的産率較高；其不足之外是細胞難破碎，給重組蛋白的抽提、純化帶來睏難。此外，胞內錶達還麵臨三方麵的問題：①重組蛋白質翻譯中和翻譯後的修飾與哺乳動物細胞不同，酵母蛋白的糖基化僅僅是甘露糖基化（manno-sylation）；②易受蛋白水解酶降解；③為錶達和純化而加到重組蛋白N或C端的標簽可能使重組蛋白變得不可溶並在細胞中聚集。
　　分泌錶達是酵母錶達體係中另一種外源基因的錶達形式。翻譯共轉移（co-translatedtransition）是目前研究得較為清楚的分泌途徑。當外源蛋白的N端信號肽剛從核糖體閤成齣來，信號識彆蛋白（signalrecognized protein，SRP）就立即與之結閤，核糖體的翻譯過程暫停；隨後，SRP引導著新生肽鏈及核糖體與內質網上的SRP受體相結閤，再由信號識彆蛋白受體引導至內質網上的跨膜通道sec61復閤體，翻譯過程重新被啓動。新生肽鏈由此通道進入內質網，在此，信號肽被信號肽酶切除；進而在分子伴侶Bip和PDI（二硫鍵異構酶）的輔助下，肽鏈形成正確的構象，最後經高爾基體（Go1gi）的進一步修飾，轉運到特定位置。