正版 分子剋隆實驗指南（第四版）（上中下冊）格林分子剋隆技術基因轉移分析策略遺傳學分子細 pdf epub mobi txt 电子书 下载 2025

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[美] MR格林，J薩姆布魯剋編陳薇，楊曉明譯 著

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• 分子剋隆
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出版社： 科学出版社

ISBN：9787030519979

商品编码：28435239747

包装：平装

开本：16

出版时间：2017-03-01

商品參數

分子剋隆實驗指南（第四版）（上中下冊）
	定價	598.00
	齣版社	科學齣版社
	版次	1
	齣版時間	2017年03月
	開本	16開
	作者	[美] M.R.格林，J.薩姆布魯剋 編；陳薇，楊曉明 譯
	裝幀	平裝
	頁數
	字數
	ISBN編碼	9787030519979

內容介紹

　　分子剋隆技術30多年來一直是生命科學領域實驗室技術的基礎。冷泉港實驗室齣版的《分子剋隆實驗指南》一書擁有的可靠性和*性，使本書成為業內*流行、*具影響力的實驗室操作指南。第四版的《分子剋隆實驗指南》保留瞭之前版本中備受贊譽的細節和準確性，10個原有的核心章節經過更新，反映瞭標準技術的發展和創新，並介紹瞭一些前沿的操作步驟。同時還修訂瞭第三版中的核心章節，以突齣現有的核酸製備和剋隆、基因轉移及錶達分析的策略和方法，並增加瞭12個新章節，專門介紹*激動人心的研究策略，包括利用 DNA 甲基化技術和染色質免疫沉澱的錶觀遺傳學分析、RNAi、新一代測序技術，以及如何處理數據生成和分析的生物信息學，例如介紹瞭分析工具的使用，如何比較基因和蛋白質的序列，鑒定多個基因的常見錶達模式等。本書還保留瞭必不可少的附錄：包括試劑和緩衝液、常用技術、檢測、一般安全原則和危險材料。任何使用分子生物學技術的基礎研究實驗室都將因擁有一冊《分子剋隆實驗指南》而受益。本書可作為學習遺傳學、分子細胞生物學、發育生物學、微生物學、神經科學和免疫學等學科的重要指導，可供生物學、醫藥衛生，以及農、林、牧、漁、檢驗檢疫等方麵的科研、教學與技術人員參考。

　　Originally published in English as Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition, by MichaelR.Green and Joseph Sambrook ? 2012 Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NewYork, USA? 2017 Science Press. Print in China.Authorized Simplified Chinese translation of the English edition ? 2012 Cold Spring Harbor LaboratoryPress. This translation is published and sold by permission of Cold Spring Harbor Laboratory Press, the owner of all rights to publish and sell the same.

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《生物化學與分子生物學前沿技術：方法與應用》 導言： 在生命科學飛速發展的今天，對生命體內部復雜機製的理解已不再僅僅停留在理論層麵，而是越來越依賴於精準、高效的實驗技術。本手冊旨在為生物化學、分子生物學、細胞生物學以及生物技術領域的科研工作者、高年級本科生和研究生提供一套全麵、係統的實驗技術指引。本書聚焦於當前研究熱點和基礎平颱技術，涵蓋瞭從基礎的蛋白質和核酸操作到復雜的細胞成像和基因編輯策略，力求在理論闡述與實際操作之間架起堅實的橋梁。 第一篇：基礎分子生物學技術精要 本篇緻力於鞏固分子生物學實驗的基石。我們將深入探討核酸的提取、純化與定量，這是後續所有分子實驗的前提。 第一章：高質量核酸的獲取 動植物組織及細胞核酸提取的優化： 詳細闡述如何針對不同組織（如富含多糖的植物、高脂的動物組織或易降解的臨床樣本）選擇最閤適的裂解緩衝液和去蛋白/去多糖策略。重點介紹酚氯仿抽提法的操作細節控製以及商業化試劑盒的適用性比較。 高純度RNA的製備與穩定性維護： 強調RNase汙染的預防，包括無菌操作規範和特定滅菌步驟。針對不同RNA應用（如qRT-PCR、測序文庫製備）對RNA質量的要求進行量化標準說明。 第二章：PCR及分子剋隆的替代方案 本章聚焦於不依賴傳統限製性內切酶連接的核酸擴增與組裝技術，以應對日益增長的復雜基因構建需求。 高保真PCR技術的選擇與故障排除： 比較不同DNA聚閤酶（如Pfu、Q5等）的保真性、延伸速度及對模闆的適應性。探討退火溫度梯度優化（Touchdown PCR）在提高特異性方麵的應用。 基於同源重組的構建策略（如Gibson Assembly）： 詳細解析該技術的反應原理，包括引物設計的關鍵考量點（重疊區長度與GC含量）。提供操作流程圖及常見失敗原因的排查清單，例如片段摩爾比失衡問題。 限製性內切酶的現代應用： 雖然強調替代方法，但本節仍需迴顧“一剪子”和“多酶切”策略在特定場景下的高效性，並介紹新型限製酶的特性。 第二篇：蛋白質組學基礎與蛋白質相互作用分析 理解蛋白質的功能，必須精確地分離、鑒定並探究其在細胞網絡中的地位。本篇專注於蛋白質的製備、分離和相互作用研究。 第三章：蛋白質分離、純化與定量 多維蛋白分離技術： 深入講解SDS-PAGE的原理及垂直電泳係統的優化。重點介紹等電聚焦電泳（IEF）在高分辨率分離中的應用，及其與雙嚮電泳（2D-PAGE）的結閤。 親和層析的進階應用： 不僅僅是Ni-NTA的使用，本章將詳細介紹標簽選擇（如GST、FLAG、SBP）對下遊實驗（如磷酸化分析或功能研究）的影響。討論洗脫條件（pH、咪唑濃度）的精細調控。 蛋白質的穩定化與儲存： 探討添加保護劑（如抑肽酶、DTT/$eta$-巰基乙醇）的最佳濃度範圍，以及冷凍保存對不同類型蛋白質（膜蛋白與可溶性蛋白）的適用性。 第四章：蛋白質相互作用的體內外探究 酵母雙雜交（Y2H）係統的優化： 討論構建高通量文庫的挑戰，以及篩選假陽性剋隆的策略（如補充篩選標記物）。強調AD/BD載體的選擇對互作強度的影響。 免疫共沉澱（Co-IP）的信號增強： 詳細解析洗滌緩衝液中去垢劑（如NP-40、Triton X-100）濃度對弱相互作用捕獲的平衡點。討論如何通過交聯劑（如DSS）固定瞬時結閤。 錶麵等離子共振（SPR）的動力學分析： 介紹SPR用於測定蛋白質結閤常數 ($K_D$) 和反應速率 ($k_{on}, k_{off}$) 的基礎原理和數據擬閤方法。 第三篇：細胞生物學與成像技術前沿 現代生物學研究越來越依賴對活細胞內動態過程的實時觀察。本篇聚焦於細胞處理和高分辨率成像技術。 第五章：細胞培養與轉染效率的提升 原代細胞的培養與傳代： 詳細說明原代神經元、肝細胞或乾細胞培養所需的特定生長因子、基質（如Matrigel或Fibronectin）的選擇和鋪闆密度控製。 高效轉染策略的選擇與優化： 對比脂質體介導、電穿孔（Electroporation）和病毒轉導（Lentivirus/AAV）的優缺點。針對難轉染細胞係（如懸浮細胞）提供電穿孔參數的優化指南。 穩轉株的篩選與鑒定： 闡述嘌呤黴素、潮黴素等抗生素的篩選濃度確定過程，以及如何利用Western Blot確認穩定錶達的蛋白質水平。 第六章：熒光顯微鏡與活細胞成像 熒光探針的選擇與光漂白控製： 比較小分子染料（如Hoechst）、熒光蛋白（GFP及其衍生物）和量子點在不同實驗場景下的適用性。提供降低光毒性和光漂白的技術（如低速采集、氧氣清除劑的使用）。 共聚焦顯微鏡的應用： 解釋共聚焦成像如何通過針孔消除離焦光，以獲得高分辨率的Z軸截麵圖像。指導Z軸掃描步長和激光功率的匹配。 FRET與FRAP在功能分析中的應用： 介紹熒光共振能量轉移（FRET）如何用於檢測分子間小於10納米的接近程度。闡述熒光漂白恢復（FRAP）如何量化分子在特定區域的動態遷移率。 第四篇：基因組編輯與核酸功能研究 本篇聚焦於對遺傳物質進行精確修飾和功能解析的技術。 第七章：CRISPR/Cas9係統的精確操作 sgRNA的設計與驗證： 介紹脫靶效應預測工具的使用，以及如何通過體外轉錄或商業化購買高純度sgRNA。強調設計時避開SNP區域的重要性。 基因敲除與敲入的策略實施： 針對基因敲除（Knockout）的隨機插入/缺失（Indel）檢測，詳細說明T7E1酶法和高通量測序分析流程。對於精確敲入（Knock-in），重點討論同源修復模闆（HDR Template）的構建方式（質粒vs寡核苷酸）。 堿基編輯與先導編輯（Prime Editing）： 介紹這些新型工具在避免雙鏈斷裂（DSB）方麵的優勢，並提供特定編輯位點選擇的考慮因素。 第八章：功能性核酸分析與調控 siRNA與shRNA的乾擾效率評估： 不僅關注靶基因mRNA的降解，更強調通過Western Blot確認目標蛋白水平的下降。探討高通量篩選中siRNA文庫的製備與去條帶化（Deconvolution）。 miRNA功能研究的挑戰： 描述如何利用miRNA模擬物（Mimics）和抑製劑（Inhibitors）來精確調控細胞內水平，並利用熒光報告係統驗證靶基因的直接調控關係。 總結： 本書力求以實驗操作者的視角，梳理從樣本處理到復雜數據分析的全流程，強調技術選擇背後的科學邏輯與潛在的實驗陷阱，是推動生命科學研究嚮更深層次發展的實用工具書。

评分☆☆☆☆☆

坦白說，閱讀這套書的過程更像是一場智力的挑戰與樂趣的結閤。它不僅僅是一本操作手冊，更是一部關於生命科學思維方式的深度探討。書中對不同實驗策略背後的科學哲學進行瞭深入的闡述，比如為什麼要選擇某個特定的報告基因，或者在設計siRNA序列時需要規避哪些生化特性。這種對“為什麼”的深挖，極大地激發瞭我作為研究者應有的批判性思維。我發現自己不再滿足於簡單地重復既有步驟，而是開始主動思考如何根據自己的研究體係進行創新性的修改和優化。例如，在討論基因敲除模型的建立時，書中對CRISPR/Cas9係統的脫靶效應進行瞭坦誠且詳盡的分析，並提供瞭多種緩解策略，這錶明作者在麵對前沿技術時保持著極高的科學審慎度，不盲目推崇，而是力求客觀公正地評估其潛力和局限性，這種嚴謹的態度是值得所有科研工作者學習的。

评分☆☆☆☆☆

這本書的詳盡程度超齣瞭我此前的任何預期。我之前閱讀過一些入門級的分子生物學參考書，它們更多地是停留在概念的介紹上，對於實驗細節的處理往往一帶而過，導緻實際操作中總會遇到各種預料之外的“小插麯”。然而，這套書的精妙之處恰恰在於它對“意外”的預判和應對策略。比如，在談到PCR産物純化時，它不僅介紹瞭常用的柱式純化法，還詳細對比瞭不同品牌試劑盒的性能差異，並給齣瞭在模闆量極低或目的片段極長時應該采取的優化措施。更令人稱道的是，它對數據分析和結果判讀的章節處理得非常到位，對於電泳圖譜中齣現的“拖尾”或“雜帶”，提供瞭多角度的故障排除清單，非常實用。我感覺作者團隊絕對是經驗豐富的一綫研究人員，他們把多年來摸爬滾打積纍下來的“實戰智慧”毫無保留地傾注到瞭文字中，使得這本書更像是一位隨時待命的資深導師，而非冰冷的教材。

评分☆☆☆☆☆

我個人對這種結構化、係統化的知識呈現方式非常偏愛。這套書的編排結構仿佛是一個精心構建的知識迷宮的導覽圖，清晰地標記瞭每一條路徑的起點、終點和可能的岔路口。上冊打下瞭堅實的理論基礎，中冊則聚焦於核心的分子剋隆技術，例如限製性內切酶的使用規範、連接效率的提升方法等，而下冊則明顯側重於更前沿的應用和高級分析，比如基因編輯工具的整閤應用和復雜的遺傳學分析模型。這種由淺入深、層層遞進的組織方式，極大地降低瞭學習麯綫的陡峭程度。即便是初學者，隻要能跟上節奏，也能逐步建立起對整個分子生物學實驗體係的宏觀認知。我尤其欣賞它對實驗步驟中“控製變量”的強調，很多關鍵的成功與否往往取決於那些看似微不足道的緩衝液濃度或孵育溫度的微小差異，這本書將這些“魔鬼細節”清晰地羅列齣來，避免瞭讀者在實驗中走彎路，極大地提高瞭實驗的成功率和可重復性。

评分☆☆☆☆☆

拿到這套書的時候，我就被它厚重實在的質感吸引住瞭。封麵設計簡潔明瞭，但內頁的印刷和排版簡直是教科書級彆的典範。我立刻翻閱瞭其中一冊，發現內容組織得極其有邏輯性，從基礎的概念引入到復雜的實驗步驟，每一步都講解得絲絲入扣，仿佛作者就在我身邊手把手地教我。特彆是那些流程圖和示意圖，精準地捕捉瞭分子生物學實驗中那些抽象而關鍵的環節，對於我這種需要反復核對操作細節的人來說，簡直是救星。我記得有一次在設計一個基因錶達載體時遇到瞭瓶頸，光是參考網上的零散資料就浪費瞭半天時間，而這本書中關於載體構建的章節，用一種近乎完美的框架梳理瞭所有需要考慮的限製位點和酶切策略，讓我茅塞頓開，立刻找到瞭問題的癥結所在。這本書的價值不僅僅在於它提供瞭“怎麼做”，更在於它深入探討瞭“為什麼這樣做”背後的分子機製和理論基礎，使得讀者在操作層麵和理論深度上都能得到極大的提升，這纔是真正嚴謹的科學著作所應有的風範。

评分☆☆☆☆☆

如果用一個詞來形容這套書的閱讀體驗，我會選擇“充實”。每一頁紙都承載著沉甸甸的知識密度，沒有一句廢話，沒有一處贅述。它的語言風格是典型的學術嚴謹，但又透著一種資深專傢對後學的關懷，講解清晰有力，避免瞭晦澀難懂的行話堆砌。我特彆留意瞭它對於生物信息學工具在分子剋隆流程中應用的介紹，發現這部分內容與時俱進，緊密結閤瞭當前大數據分析的趨勢，清晰地指明瞭傳統濕實驗如何與前沿的計算方法進行高效整閤。這使得這本書的參考價值遠遠超齣瞭傳統的實驗室手冊範疇，它成功地架起瞭基礎實驗技術與現代生命科學研究範式的橋梁。對於任何希望在分子生物學領域深耕，尤其是在基因功能探索和新型分子工具開發方麵有所建樹的人來說，這套書無疑是一份不可或缺的、具有長期生命力的知識資産。